Fasahar peptide FRET

Canja wurin makamashi mai haske (FRET)

Fluorescence resonance Energy Canja wurin (FRET) wani tsari ne wanda ba na radiyon makamashi ba wanda mai ba da gudummawar kuzarin jihar ke canjawa zuwa yanayin jin daɗi mai karɓa ta hanyar hulɗar ma'auratan lantarki na intermolecular.Wannan tsari ba ya haɗa da photons don haka ba shi da radiyo.Wannan kimar yana da fa'idodin zama mai sauri, m da sauƙi.

Rini da aka yi amfani da shi a cikin gwajin FRET na iya zama iri ɗaya.Amma a yawancin aikace-aikace, a zahiri ana amfani da rini daban-daban.A taƙaice, canja wurin makamashin resonance mai haske shine canja wurin biyu na dipoles daga mai bayarwa (dye 1) zuwa mai karɓa ( rini 2) lokacin da ƙungiyar masu ba da gudummawa ta yi farin ciki.Gabaɗaya, nau'in watsawar ƙungiyar Donor fluorophore ya mamaye da bakan na ƙungiyar Acceptor."Lokacin da nisa tsakanin fluorophores biyu ya dace (10 - 100 A), ana iya lura da canja wurin makamashin fluorophore daga mai ba da gudummawa ga mai karɓa."Hanyar canja wurin makamashi ya dogara da tsarin sinadarai na mai karɓa:

1. Yana juyewa zuwa girgizar kwayoyin halitta, wato, hasken wutan lantarki yana ɓacewa.(Mai karɓar mai karɓar haske ne mai kashe wuta)

2. Fitar da ake fitarwa ya fi mai karɓa da kansa ƙarfi, wanda ke haifar da jajayen yanayi a cikin bakan na biyu na fluorescence.(Masu karɓan iska ne masu haske).

Ƙungiya mai ba da gudummawa (EDANS) da kuma mai karɓa (DABCYL) suna da alaƙa iri ɗaya da nau'in halitta na kwayar cutar HIV, kuma lokacin da ba a cire haɗin ba, DABCYL zai iya kashe EDANS sannan ya zama wanda ba a iya gano shi zuwa fluorine.Bayan katsewar kwayar cutar HIV-1, DABCYL ba ta kashe EDANS, kuma ana iya gano EDANS luciferases daga baya.Ana iya lura da kasancewar masu hana protease ta hanyar canje-canje a cikin ƙarfin haske na EDNS.

FRET peptides kayan aiki ne masu dacewa don nazarin ƙarancin peptidase.Tun da ana iya ci gaba da lura da tsarin amsawarsa, yana ba da hanya mai dacewa don gano ayyukan enzyme.Shen da aka samar bayan hydrolysis na peptide bonds ta mai ba da gudummawa / mai karɓa yana ba da ma'auni na aikin enzyme a ƙididdigar nanomolar.Lokacin da peptide FRET ya kasance cikakke, yana nuna bacewar filasha na ciki kwatsam, amma lokacin da duk wani haɗin peptide da ke gaban mai bayarwa / mai karɓa ya karye, yana fitar da walƙiya, wanda za'a iya gano shi gabaɗaya sannan kuma ana iya ƙididdige ayyukan enzyme.